　　《精编实用免疫学实验》通过精选，收集编著了涉及机体免疫功能检测、抗体制备及利用免疫学原理方法进行的抗原抗体检测等先进、实用内容的实验，概括为八大部分：抗体制备、纯化及标记；利用抗原抗体反应进行的检测；机体免疫细胞的分离与鉴定；机体特异性细胞免疫功能的检测；机体体液免疫功能的检测；机体非特异性免疫功能检测；HLA分型；淋巴细胞活化信号转导分子检测。

内页插图

第一篇抗体的制备、纯化及标记
一、免疫血清的制备及效价检测
实验1 弗氏佐剂的制备及与抗原的混合
实验2 抗原免疫兔子
实验3 免疫血清的分离与保存
实验4 双向琼脂扩散试验检测兔抗羊IgG血清效价
实验5 凝集实验检测兔抗大肠杆菌抗血清效价
二、单克隆抗体的制备
实验6 单克隆抗体的制备
三、抗体的纯化
实验7 盐析法纯化免疫球蛋白
实验8 亲和柱层析法纯化免疫球蛋白
实验9 SDS-PAGE法检测免疫球蛋白纯度
四、抗体的标记
实验10 异硫氰酸荧光素标记IgG抗体
实验11 R-藻红蛋白标记IgG抗体
实验12 辣根过氧化物酶标记IgG抗体
实验13 生物素标记IgG抗体

第二篇利用标记抗体进行的检测
一、免疫荧光法
实验14 直接免疫荧光法标记人T细胞
实验15 间接免疫荧光法检测大肠杆菌
实验16 免疫荧光法显示细胞的微管
二、酶免疫测定
实验17 间接ELISA检测兔抗羊IgG抗体效价
实验18 夹心ELISA法检测小鼠血清IL.2
实验19 酶联免疫斑点试验检测IFN-y分泌细胞数目
实验20 ELISPOT法检测小鼠脾脏抗羊IgG抗体形成细胞数目
实验21 应用免疫组化ABC法检测小鼠脾脏Thy1.2阳性细胞的分布
实验22 免疫印迹试验

第三篇免疫细胞的分离与鉴定
一、免疫细胞分离
实验23 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
实验24 Percoll不连续密度梯度离心法分离NK细胞
实验25 小鼠脾脏淋巴细胞分离及活率测定
实验26 肿瘤浸润淋巴细胞的制备
实验27 黏附法分离单核细胞和淋巴细胞
实验28 尼龙毛柱法分离T细胞与B细胞
实验29 E.花环形成法从单个核细胞中分离T细胞
实验30 免疫磁珠分选法分离小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞
实验31 流式细胞仪检测小鼠IFN-'y分泌细胞
实验32 小鼠髓源性DC的分离及诱导培养
二、免疫细胞鉴定

第四篇机体免疫功能检测
一、细胞吞噬相关功能检测
实验33 体外试管法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
实验34 中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能
实验35 利用流式细胞仪检测巨噬细胞吞噬活性
实验36 巨噬细胞一氧化氮产生量的测定
实验37 中性粒细胞呼吸爆发的检测
二、细胞增殖及活力检测
实验38 MTT比色法检测淋巴细胞活力
实验39 ATP生物荧光检测法检测抗癌药物对肿瘤细胞活力的影响
三、细胞介导的细胞毒试验
实验40 51Cr释放试验
实验41 乳酸脱氢酶释放试验
实验42 涂片染色法检测凋亡细胞
实验43 AnnexinV-FITC/PI双染色法检测凋亡细胞
实验44 凋亡细胞DNA电泳
实验45 TUNEL技术检测凋亡细胞
四、APC抗原提呈功能分析
实验46 树突状细胞抗原提呈能力检测
五、免疫球蛋白的定量
实验47 单向免疫扩散法检测小鼠血清IgG、IgM、IgA
实验48 夹心ELISA法检测小鼠肠液中分泌型IgA水平
六、补体的细胞毒作用检测
实验49 补体的细胞毒作用检测
参考文献

附录一常用溶液配制方法
附录二荷瘤小鼠模型建立方法
一、腹水瘤小鼠模型建立方法
二、小鼠移植性实体瘤模型的建立
附录三南京大学生命科学学院本科生免疫学实验教学内容及安排

精彩书摘

　　三、抗体的纯化
　　在许多情况下我们需要用纯化抗体进行研究及检测。
　　抗体有多种来源。单克隆抗体可从杂交瘤细胞培养上清液中纯化；多克隆抗体可从血清中纯化；基因重组抗体因表达系统不同可存在于表达受体细胞培养液或细胞内，且胞内表达往往以聚集、无活性的包含体的形式存在。胞外可溶性表达抗体可直接纯化，胞内包含体形式的抗体纯化后还需要通过复性使其转变为活性形式。
　　基于抗体的来源及纯度要求不同，抗体纯化方法也不同。一般应综合考虑产量和纯度，尽可能用较少的纯化步骤获得较高纯度的目标蛋白。沉淀法是一种快速但纯度不高的纯化方法，一般用高浓度盐溶液使抗体沉淀而与溶液中的脂类、碳水化合物、核酸、低分子质量蛋白质等物质分开。这种用盐沉淀蛋白的方法也称为盐析法，常常用在蛋白纯化的起始阶段。除了盐，也用一些多聚物（如PEG）及有机溶液沉淀蛋白质。
　　抗体纯化的传统方法在盐析法之后常常还包括好几个步骤，但现在普遍使用的亲和层析法可使纯化步骤大为减少，甚至只需一步就可获得高产量和高纯度的目标抗体。该法利用抗体与固定在胶基质上的特定配体的特异、可逆结合将抗体与溶液中其他物质分开，是获得纯净抗体的理想方法，分离纯度可达99%，产量可达10%-50%。亲和配体若是与某种抗体同种型结合的蛋白A和蛋白G，得到的纯化抗体即为某种同种型抗体，如IgG、IgM或IgA；亲和配体若为特定抗原，得到的抗体即为抗原特异性抗体。
　　在抗体纯化过程中，目标抗体的监测非常重要。一个快速、简单的蛋白浓度监测方法是在280nm波长处进行光度测量。要进行抗体的特异监测，可应用ELISA法、SDS-PAGE法或WesternBlot法。
　　实验7盐析法纯化免疫球蛋白
　　利用一定浓度的盐溶液使混合蛋白溶液中某种蛋白质成分析出而得到纯化的蛋白质的纯化方法通常称为蛋白质的盐析。是一种快速但所得蛋白纯度不高的蛋白粗提方法。
　　硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、氯化钠等盐都能使蛋白质发生盐析。硫酸铵因其在水中溶解度高且受温度影响较小而最常应用。一般认为，在pH7.0时，50%的饱和硫酸铵可将所有的免疫球蛋白都沉淀出来；33%饱和度时，大部分IgG可沉淀出来；40%饱和度时，IgG沉淀物的得率最高，但含p球蛋白部分增多。
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