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评分从5种植物体中提取只含有初生细胞壁的蛋白质[3]是分离和鉴定大量细胞壁蛋白质的尝试之一。通过过滤收集细胞,通过在5种不同的缓冲液中搅拌细胞提取蛋白质。缓冲液包含0.2mol/LCaCl2、50mmol/LCDTA、50mmol/L乙酸钠(pH6.5)、2mmol/L的二硫苏糖醇、1mol/LNaCl和0.2mol/L硼酸,pH7.5,缓冲液用于后续和非后续的提取体系。Blee等[4]采用了同时具有初生细胞壁和次生细胞壁的转化了的烟草的悬浮细胞系作为活细胞直接提取总蛋白的来源。蛋白质提取用0.2mol/LCaCl2、50mmol/LCDTA。
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评分沈世华,中国科学院植物研究所研究员,博士生导师。兼任中国科学院唐山高新技术研发与转化中心工程植物事业部部长,中国植物生理学会植物生物质与生物能源专业委员会委员。
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评分这个方法的改进后则是用真空透析的原生质体[5]或整个植物组织[6,7]来洗涤非原生质体和细胞壁的蛋白质。这个方法包括一个灌输步骤借助盐溶液或其他的溶液通过温和降低压力从而进入细胞间隙。Roger等[5]用1mol/LNaCl和0.4mol/LCaCl2来透析来自于纤维植物下胚轴的固定原生质体,并通过离心和过滤收集非原生质体。马铃薯块茎中的非原生质体通过含有0.6mol/L的NaCl透析组织获得,然后,离心收集提取物[6]),已使用这种方法收集叶片中的汁液,这种方法采用含20mmol/L抗坏血酸、20mmol/L氯化钙[7]的溶液。根汁液收集通过简单切割和离心组织收获分泌物非破坏性蛋白质提取方法的一个主要的缺点是,细胞壁蛋白质的产量通常较低。目前以基因组为基础的估算预测出数以百计的分泌蛋白[9];然而只有这个数量的一小部分,在没有破坏的植物细胞壁的蛋白质研究中被发现。第二个缺点是质膜断裂的可能性将导致伴随细胞质和膜蛋白的细胞壁组分的污染。由于污染是一个巨大的障碍,因此确保细胞壁的纯度的方法应包括针对典型的污染蛋白质如检测标记酶的活性或Western杂交。
评分植物蛋白质组学实验指南
评分还没仔细看 感觉还行
评分正版书,很不错,对生物专业有用
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