正如所有的亚细胞的蛋白质组学研究,提取细胞壁蛋白质组的关键因素是提取的蛋白质片段不能被来自细胞其他部位的蛋白质污染。通常情况下用两种方法来分离细胞壁细胞壁的蛋白质。非破裂和破裂蛋白质提取两种方法各自有其优缺点,特别是有关蛋白质污染和改进当前的提取方法。第二个重要方面是多糖多酚类污染物的清除,它们在双向电泳中产生不良作用。过去,细胞培养为细胞壁蛋白质的提取提供了均一并且相对“干净”的组织来源。虽然分化的组织在生物学研究上相关性更强,但是研究起来更加复杂和困难,目前对于这些组织的大规模的蛋白质组的成果相对比较新。本章简单总结现有细胞壁蛋白质提取方法并且描述一种从紫花苜蓿茎中提取细胞壁蛋白质的具体方法。
评分沈世华,中国科学院植物研究所研究员,博士生导师。兼任中国科学院唐山高新技术研发与转化中心工程植物事业部部长,中国植物生理学会植物生物质与生物能源专业委员会委员。
评分已经从挪威云杉木质部悬浮培养的活细胞中提取了细胞壁的蛋白质。通过在1mol/L氯化钠的缓冲液中孵育的方法将细胞壁蛋白质从经过过滤和洗涤的细胞中洗脱下来。分离的细胞进行匀浆,随之蛋白质被释放,但在离子作壁蛋白质中纯化出了与延伸相关的细胞壁蛋白质[17洗脱细胞壁的蛋白质。通过离子交换,氯化钙与结合蛋
评分 评分这个方法的改进后则是用真空透析的原生质体[5]或整个植物组织[6,7]来洗涤非原生质体和细胞壁的蛋白质。这个方法包括一个灌输步骤借助盐溶液或其他的溶液通过温和降低压力从而进入细胞间隙。Roger等[5]用1mol/LNaCl和0.4mol/LCaCl2来透析来自于纤维植物下胚轴的固定原生质体,并通过离心和过滤收集非原生质体。马铃薯块茎中的非原生质体通过含有0.6mol/L的NaCl透析组织获得,然后,离心收集提取物[6]),已使用这种方法收集叶片中的汁液,这种方法采用含20mmol/L抗坏血酸、20mmol/L氯化钙[7]的溶液。根汁液收集通过简单切割和离心组织收获分泌物非破坏性蛋白质提取方法的一个主要的缺点是,细胞壁蛋白质的产量通常较低。目前以基因组为基础的估算预测出数以百计的分泌蛋白[9];然而只有这个数量的一小部分,在没有破坏的植物细胞壁的蛋白质研究中被发现。第二个缺点是质膜断裂的可能性将导致伴随细胞质和膜蛋白的细胞壁组分的污染。由于污染是一个巨大的障碍,因此确保细胞壁的纯度的方法应包括针对典型的污染蛋白质如检测标记酶的活性或Western杂交。
评分 评分沈世华,中国科学院植物研究所研究员,博士生导师。兼任中国科学院唐山高新技术研发与转化中心工程植物事业部部长,中国植物生理学会植物生物质与生物能源专业委员会委员。
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