發表於2024-11-18
序
前言 v
1 概述 1
1.1 流式細胞術基本概念 2
1.2 分析型流式細胞儀介紹 5
1.3 分選型流式細胞儀介紹 9
參考文獻 13
2 流式細胞儀的原理 14
2.1 液流係統 15
2.2 光路係統 18
2.3 檢測分析係統 28
2.4 分選係統 31
參考文獻 36
3 流式圖 37
3.1 流式通道 38
3.2 流式直方圖 39
3.3 流式散點圖 42
3.4 流式等高綫圖 45
參考文獻 46
4 流式細胞術的基本操作與技巧 48
4.1 樣品製備 49
4.1.1 獨立細胞樣品製備 49
4.1.2 免疫器官樣品製備 51
4.1.3 實體髒器樣品製備 52
4.2 熒光素偶聯抗體及其標記方法 53
4.2.1 熒光素 53
4.2.2 熒光素偶聯抗體 57
4.2.3 樣品封閉 58
4.2.4 熒光素偶聯抗體標記 60
4.3 光電倍增管電壓設定 62
4.4 對照的設置 65
4.4.1 陰性對照的設置 65
4.4.2 FMO對照 68
4.4.3 陽性對照的設置 68
4.5 補償調節 69
4.5.1 補償調節的原理 69
4.5.2 調節補償的具體方法 71
4.5.3 三色和四色分析補償調節方法 74
4.5.4 影響補償大小的因素 76
4.6 閾值設定 78
4.7 流式分析中的死細胞問題 79
4.7.1 減少樣品中死細胞比例的方法 79
4.7.2 流式分析時區分死細胞和活細胞的方法 80
4.8 流式分選模式選擇 85
4.8.1 純化模式 86
4.8.2 富集模式 87
4.8.3 單細胞模式 87
4.9 上樣速度控製 88
4.9.1 流式分析速度控製 89
4.9.2 流式分選速度控製 89
4.10 分選設門基本原則 91
4.11 流式分選基本步驟 93
參考文獻 94
5 流式分析術的應用 96
5.1 細胞群比例測定 97
5.2 錶型測定 101
5.3 流式檢測細胞因子 106
5.3.1 胞內染色法檢測細胞因子 107
5.3.2 胞內染色法與ELISA法比較 112
5.3.3 CBA法測定細胞因子 114
5.3.4 CBA法與ELISA法比較 116
5.4 檢測細胞增殖 117
5.4.1 相對計數法 118
5.4.2 示蹤染料標記法 122
5.4.3 Brdu標記法 127
5.4.4 其他方法 129
5.5 檢測細胞凋亡 130
5.5.1 Annexin Ⅴ/PI雙染色法 131
5.5.2 SYTO/PI雙染色法 133
5.5.3 細胞DNA含量分析法檢測細胞凋亡 134
5.5.4 綫粒體損傷檢測法 135
5.5.5 活化的caspase-3檢測法 139
5.5.6 熒光素偶聯的caspase抑製劑(FLICA)標記法 139
5.5.7 甲酰胺誘導ssDNA單抗檢測法 140
5.5.8 TUNEL法 141
5.6 檢測細胞周期 142
5.6.1 非特異性核酸熒光染料標記法 142
5.6.2 特異性細胞周期調節蛋白檢測法
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