1 基因工程的四大要素及实施要点
1.1 基因工程操作中常用的工具酶
1.2 基因的分离
1.3 基因工程载体
1.4 受体细胞和重组基因的导入
1.5 基因重组的方法
1.6 基因重组体的筛选

2 外源基因在宿主细胞中的高效表达
2.1 有效的转录起始与基因的高效表达
2.2 mRNA的有效延伸和转录终止与基因的高效表达
2.3 mRNA的稳定性与基因的高效表达
2.4 有效的翻译起始与基因的高效表达
2.5 遗传密码应用的偏倚性与基因的高效表达
2.6 mRNA的二级结构与基因的高效表达
2.7 RNA的加工与基因的高效表达
2.8 mRNA序列上终止密码的选择
2.9 表达质粒（或载体）的拷贝数及稳定性与基因的高效表达
2.10 外源蛋白的稳定性与基因的高效表达

3 基因的融合和融合蛋白的表达
3.1 利用基因融合技术表达外源基因的缘由
3.2 基因融合的策略
3.3 基因融合和重组蛋白的产生
3.4 基因融合和展示筛选
3.5 基因融合和蛋白分泌
3.6 融合蛋白的纯化
3.7 融合蛋白的位点特异性切割
附录重组蛋白表达和纯化中常用的融合标签

4 外源基因的分泌表达
4.1 外源基因在E.coli细胞中的分泌表达
4.2 外源基因在枯草杆菌中的分泌表达
4.3 a-因子前导序列介导的酵母细胞分泌系统
4.4 外源基因在哺乳动物细胞中的分泌表达

5 重组蛋白的正确折叠及修饰
5.1 重组蛋白的可溶性表达和折叠
5.2 重组蛋白的重折叠
5.3 外源蛋白在翻译后的修饰

6 几种真核细胞表达系统
6.1 哺乳动物细胞表达系统
6.2 外源基因在哺乳动物细胞中的组成性表达和诱导性表达
6.3 核型多角体病毒为载体的昆虫（细胞）表达系统
6.4 转基因动物及其应用
6.5 转基因植物及其应用
6.6 DNA疫苗

7 分子杂交技术
7.1 探针与目标核酸相互作用的原理
7.2 探针的选择和特异性
7.3 杂交的速率与探针长度、浓度及杂交加速剂的关系
7.4 杂交的最适条件
7.5 放射性探针的制备
7.6 非放射性探针的制备
7.7 放射性和非放射性标记探针的应用范围
7.8 DNA微阵列——基因组芯片

8 粒子轰击和基因转移
8.1 粒子轰击技术简介
8.2 粒子轰击技术的应用范围

9 聚合酶链反应及其应用
9.1 聚合酶链反应的原理
9.2 标准的PCR扩增方案
9.3 PCR引物及其设计
9.4 关于热稳定的DNA聚合酶
9.5 PCR对模板质量的要求
9.6 PCR反应缓冲液和循环（周期）数
9.7 PCR相关技术的原理及其应用

10 各种生物学展示技术
10.1 噬菌体展示技术
10.2 细菌展示技术
10.3 酵母展示技术
10.4 核糖体展示技术
10.5 mRNA展示技术

11 基因打靶技术及其应用
11.1 同源重组与基因打靶
11.2 组织特异性的基因打靶
11.3 转座子介导的基因打靶
11.4 RNA干涉与基因敲除
11.5 反义核酸技术
11.6 细菌基因敲除方法
11.7 基因打靶技术的应用

12 DNA序列分析
12.1 Sanger的双脱氧链终止测序法
12.2 Maxam-GilbertDNA化学降解法
12.3 关于变性聚丙烯酰胺测序凝胶
12.4 全基因组DNA序列的分析

13 基因突变
13.1 寡核苷酸介导的基因突变
13.2 盒式突变法
13.3 利用PCR进行DNA序列的突变
13.4 关于随机突变

14 寡核苷酸的化学合成
14.1 寡核苷酸片段固相合成的原理及步骤
14.2 寡核苷酸片段的纯化及鉴定

15 蛋白质相互作用及其分析方法
15.1 蛋白质相互作用的重要性
15.2 蛋白质相互作用所产生的结果
15.3 蛋白质相互作用的类型
15.4 酵母双杂交系统
15.5 利用绿色荧光蛋白（GFP）片段重组装研究蛋白质相互作用——细菌双杂交法
15.6 蛋白质相互作用分析的in vitro方法

16 蛋白质一核酸相互作用
16.1 研究蛋白质一核酸相互作用的重要性
16.2 蛋白质一核酸相互作用的类型
16.3 蛋白质一核酸相互作用分析的in vitro方法

17 蛋白质工程概述
17.1 蛋白质分子的结构分析
17.2 蛋白质的结构预测与分子设计
17.3 基因工程是实现蛋白质工程的关键技术
参考文献

精彩书摘

　　酵母表达体系是真核细胞中应用最广的外源基因表达体系。作为一种单细胞的低等真核生物，酵母细胞具有对外源蛋白进行翻译后修饰的能力；由于其对营养要求低、生长快，可通过大规模高密度发酵产业化。利用酵母表达系统最成功的例子之一是利用酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原，制造乙肝疫苗，惠及亿万民众，特别是儿童。酵母表达体系有两种：细胞内表达和分泌表达。胞内表达的长处是重组蛋白的产率较高；其不足之外是细胞难破碎，给重组蛋白的抽提、纯化带来困难。此外，胞内表达还面临三方面的问题：①重组蛋白质翻译中和翻译后的修饰与哺乳动物细胞不同，酵母蛋白的糖基化仅仅是甘露糖基化（manno-sylation）；②易受蛋白水解酶降解；③为表达和纯化而加到重组蛋白N或C端的标签可能使重组蛋白变得不可溶并在细胞中聚集。
　　分泌表达是酵母表达体系中另一种外源基因的表达形式。翻译共转移（co-translatedtransition）是目前研究得较为清楚的分泌途径。当外源蛋白的N端信号肽刚从核糖体合成出来，信号识别蛋白（signalrecognized protein，SRP）就立即与之结合，核糖体的翻译过程暂停；随后，SRP引导着新生肽链及核糖体与内质网上的SRP受体相结合，再由信号识别蛋白受体引导至内质网上的跨膜通道sec61复合体，翻译过程重新被启动。新生肽链由此通道进入内质网，在此，信号肽被信号肽酶切除；进而在分子伴侣Bip和PDI（二硫键异构酶）的辅助下，肽链形成正确的构象，最后经高尔基体（Go1gi）的进一步修饰，转运到特定位置。