生命科学实验指南系列：精编细胞生物学实验指南 [Short Protocols in Cell Biology] 下载 mobi epub pdf 电子书 2024

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内容简介

　　《生命科学实验指南系列：精编细胞生物学实验指南》内容翔实全面，主要包括：细胞培养、细胞的制备与分离、亚细胞组分分离和细胞器分离、抗体、显微镜技术、细胞蛋白质的特性、电泳与免疫印迹、蛋白标记和免疫沉淀、蛋白质的磷酸化作用、蛋白质转运，以及细胞增殖、衰老和死亡、体外重建、细胞黏附和细胞外基质、细胞的能动性、细胞器运动。全书还附有各种实用信息和数据，包括试剂与溶液的配制、细胞生物学研究中常用的药物概要和各种常用技术的介绍等。

内页插图

目录

译者序
前言
第1章 细胞培养
单元1．1 哺乳动物细胞培养的基本方法
基本方案单层细胞的胰酶消化和传代
备择方案悬浮培养的细胞传代
支持方案1 人单层贴壁细胞的冻存
支持方案2 悬浮细胞的冻存
支持方案3 人细胞系的解冻与复苏
支持方案4 用血细胞计数板和台盼蓝染色法测定细胞数目及活性
支持方案5 细胞运输的准备
单元1．2 适于哺乳动物细胞的培养基
基本方案1 制备含血清的培养基
基本方案2 制备血清减量或无血清培养基
基本方案3 HAT选择培养基的制备
基本方案4 转化细胞在软琼脂中的生长
支持方案1 培养基中pH的调节
支持方案2 抗生素在培养基中的应用
单元1．3 细胞培养的无菌技术
基本方案1 无菌技术
基本方案2 层流式超净台的使用
单元1．4 灭菌和过滤
基本方案1 液体的高压灭菌
备择方案干燥物品的高压消毒
基本方案2 干热灭菌和清除热原法
基本方案3 消毒剂的应用：70%乙醇
溶液的过滤除菌
基本方案4 真空过滤
基本方案5 小体积非水溶性液体的正压过滤
单元1．5 确定和控制细胞培养的微生物污染
基本方案1 细菌和真菌污染的检测
基本方案2 直接培养法检测支原体污染
基本方案3 应用抗生素控制微生物污染
单元1．6 酵母培养及培养基
培养基的制备
酵母培养的综合考虑

第2章 细胞的制备与分离
单元2．1 成纤维细胞培养的建立
基本方案
单元2．2 人淋巴细胞的制备和培养
基本方案1 通过高分子质量的蔗糖一泛影钠（Ficoll-Hypaque）梯度离心制备淋巴细胞
基本方案2 从淋巴细胞群里制备单核／巨噬细胞和树突状细胞
基本方案3 通过包被在磁珠表面的单克隆抗体分选T细胞和B细胞
单元2．3 人脐静脉内皮细胞的制备
基本方案
单元2．4 转染EB病毒产生永生的B细胞株
基本方案
单元2．5 激光捕获显微切割
基本方案从组织切片中分离一种纯的细胞群
支持方案苏木素和伊红染色组织的激光显微切割

第3章 亚细胞组分分离和细胞器分离
单元3．1 细胞组分分离概述
单元3．2 分离大鼠肝细胞质膜片层与浆膜结构域
基本方案1 分离质膜片层
支持方案1 检测碱性磷酸二酯酶I的活性
基本方案2 分离质膜结构域
支持方案2 K+激活的对硝基苯酚磷酸酯酶活性测定实验
支持方案3 5'-核苷酸酶活性测定实验
支持方案4 间接免疫荧光法检测与质膜片层相连的蛋白质
单元3．3 利用差速及密度梯度离心法从组织和细胞中分离Golgi膜
基本方案1 利用蔗糖密度筛从大鼠肝脏中快速分离Golgi膜
基本方案2 将大鼠肝脏提取的轻线粒体组分悬浮于非连续的蔗糖梯度液中来分离Golgi膜
基本方案3 将培养的细胞悬浮于非连续的蔗糖梯度液中来分离Golgi膜
基本方案4 用自发形成梯度的IODIXANOL梯度液从肝细胞微粒体组分中分离Golgi膜
支持方案 测定UDP-半乳糖半乳糖基转移酶
单元3．4 利用差速离心及密度梯度离心从组织及细胞中分离溶酶体
基本方案1 使用自发形成梯度的PERCOLL梯度液从大鼠肝脏中分离溶酶体
基本方案2 利用自发形成梯度的PERCOLL梯度液从培养的人HL-60细胞中分离溶酶体
支持方案1 酸性磷酸酶的测定
……
第4章 细胞生物学研究的工具——抗体
第5章 显微镜术
第6章 细胞蛋白质的特性
第7章 电泳与免疫印迹
第8章 蛋白标记和免疫沉淀
第9章 蛋白质的磷酸化作用
第10章 蛋白质转运
第11章 细胞增值，细胞衰老和细胞死亡
第12章 体外重建
第13章 细胞黏附与细胞外基质
第14章 细胞的能动性
第15章 细胞器运动
附录
参考文献
索引

前言/序言

　　细胞生物学的研究体系日益扩大。要想领略这种扩展，途径之一便是去参加本领域的重要会议，诸如美国细胞生物学学会（American Society for CellBiology）的年会。你可以悠闲地漫步于大厅的展板区，甚至于都不必驻足于某一版面，就可以深刻感受到细胞生物学范畴之辽阔。对于那些在过去一二十年间经常光顾这种展厅的人们来说，细胞生物学的这种动态态势以及这种爆发性的发展是毫不奇怪的——在愈来愈多的研究体系中只能是愈来愈多。以往展板区域主要由细胞的画面主宰，这些细胞都经由电子显微镜学家的固定（很呆板地），并且只是以黑白两色显示出来。虽然电子显微镜目前对于我们了解细胞构筑仍然有贡献，但新近展板区已出现一排排活细胞的电脑增晰视频影像（computer-enhanced video images），这些细胞均经过不完全活性染色才显示，诸如罗丹明红（rhodamine red）、荧光素绿（fluorescein green）以及被称作绿色荧光蛋白的特异绿色等。冰冻蚀刻的加入则以冷冻定帧法（freeze frame）来展现细胞。此外在视频影像间还散在有另一些展板，它们详细记录了众多细胞成分的分子特征。还有一些展板报道了用基因削减或基因敲除显示的有关它们功能的新近发现。正如罗盘的星点有其应有的位置一样，酵母、果蝇和蠕虫的遗传学研究兴旺于一方，而在细胞生物学基础研究和临床医学之间架设桥梁的研究也在另一方不断地涌现。
　　很显然，今天称自己为细胞生物学家的科学家乃是一个多学科群体，这种多学科性质隐藏着巨大的学术价值。那些曾经将研究学科分隔开来的边界如今已逐渐消失，细胞生物学家也已赞同没有哪一种单独的途径可以揭开细胞的奥秘。新技术和新技术学随着试验成真并肩而至，并且用作细胞生物学在本领域开拓的工具。正是细胞生物学的这一面目的变化以及其代表巨大挑战的方法学共同促成了《精编细胞生物学实验指南》的问世。本书要阐述的一个基本问题是，在细胞生物学领域里应在何处划出其边界。我们的决定是拒绝划出这种边界，因为它们完全是人为的，并且，糟糕的是，会产生反效果。相反，我们企图努力弥合该领域的多样性。本指南要包括那些对细胞生物学家仍有价值的“经典的”方法，也要提供旨在成为今后之经典的程序。
　　我们没有理由怀疑细胞生物学的研究领域随时都会很快地停滞。事实上，一名细胞生物学家之所以激励不已，部分地出于革新和新发现所带来的不间断的惊奇。为此，我们这一专业需要一些可靠的、便于使用的，而且还要反映出该领域扩展的实验方法学的资料。为了符合这一要求，我们收集了覆盖细胞生物学众多方面的一系列实验方案，虽然这一套方案还不完全，但可以认为它是一个“初学者工具箱”，包括有许许多多我们这一专业中最常用和必需的工具。
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