內容簡介
《診斷微生物學新技術》由兩個重要部分組成:(1)技術篇;(2)應用篇。第一部分:係統、詳細地介紹目前用於臨床微生物學檢測的各種新技術,包括自動化血培養、快速抗原試驗、抗體檢測、基於流式細胞儀的抗生素耐藥檢測技術、實時細胞分析技術、基於脂肪酸的微生物鑒定和藥敏試驗、基於MALDI-TOF質譜技術的微生物鑒定、各種分子診斷技術如體外核酸擴增技術、PCR及其衍生技術、非PCR靶擴增技術、探針擴增技術、信號擴增技術、實時核酸定量技術、擴增産物檢測技術、直接核酸測序技術、芯片技術、基於非放大探針的微生物檢測和鑒定、分子分型技術、PCR/電噴霧電離質譜等先進技術的原理、方法和特點,為這些新技術在臨床微生物學中的應用提供堅實的技術基礎。第二部分:重點介紹上述新技術在臨床微生物檢驗中的應用,包括細菌快速鑒定和藥敏試驗等。
目錄
原著作者寄語
序言一
序言二
序言三
譯者的話
第一篇 技術篇
第一章 自動化血培養
第二章 呼氣試驗檢測幽門螺鏇杆菌和麯黴菌
第三章 快速抗原檢測
第四章 抗體檢測的原理及應用
第五章 流式細胞技術在抗生素耐藥檢測的應用
第六章 以生化反應為基礎的微生物鑒定係統
第七章 感染性疾病生物標誌物:非抗體依賴性宿主應答
第八章 采用實時細胞功能分析係統進行微生物和病毒感染的功能檢測
第九章 基於細胞脂肪酸的微生物鑒定和藥敏試驗
第十章 MALDI—TOF質譜技術在微生物鑒定中的應用
第十一章 核酸提取技術
第十二章 非擴增核酸探針技術在微生物檢測和鑒定中的應用
第十三章 最先進的分子分型技術
第十四章 體外核酸擴增技術
第十五章 PCR及其衍生技術
第十六章 非PCR靶核酸擴增技術
第十七章 探針擴增技術
第十八章 信號擴增技術
第十九章 實時定量核酸分析
第二十章 擴增産物檢測技術
第二十一章 凝膠電泳、DNA印跡和微孔闆比色係統
第二十二章 直接核苷酸測序鑒定擴增産物
第二十三章 微陣列擴增産物的檢測與鑒定
第二十四章 利用熒光淬滅或能量轉移機製實時檢測擴增産物
第二十五章 電離質譜技術鑒定微生物核酸擴增産物
第二十六章 PCR擴增産物滅活
第二篇 應用篇
第二十七章 通用基因擴增和測序技術在細菌鑒定中的應用
第二十八章 血液和血液製品的分子篩查技術
第二十九章 性傳播疾病的分子診斷
第三十章 結核分枝杆菌診斷和耐藥性檢測新進展
第三十一章 快速篩查和鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌
第三十二章 食源性病原體的最新檢測方法
第三十三章 床旁即時分子診斷的技術與應用
第三十四章 微生物感染的分子鑒彆診斷:多重PCR的方法,應用和技術平颱
第三十五章 微生物診斷技術在獸醫學領域的進展
第三十六章 獸醫診斷病毒學最新進展:來自世界動物衛生組織閤作中心的報告
第三十七章 深度測序:技術進展與臨床微生物學應用
第三十八章 診斷病毒學中病毒RNA剪接的測定
第三十九章 應用基因芯片檢測和鑒定臨床重要真菌
第四十章 艱難梭菌的實驗室檢測技術進展
第四十一章 HIV感染的分子診斷:當前發展狀況
第四十二章 微球懸浮陣列法檢測和鑒定呼吸道病毒
第四十三章 人乳頭狀瘤病毒感染的分子診斷與監測
第四十四章 分子檢測在膿毒癥實驗室診斷中的作用
第四十五章 檢測新發感染病原體的先進病理學技術
第四十六章 利用宿主和微生物microRNA譜診斷及評價微生物感染
第四十七章 先進技術檢測結果的解讀和臨床相關性
精彩書摘
《診斷微生物學新技術》:
二、DNA印跡技術的原理
DNA印跡技術是用於檢測樣品中特定DNA序列的分子生物學方法。DNA印跡技術結閤瞭凝膠電泳和探針雜交的方法。片段大小和探針序列被用於決定結果的特異性。根據分子大小在瓊脂糖凝膠電泳上分離待測DNA。然後,凝膠上帶負電荷的DNA條帶被轉移到帶正電荷的膜上。轉移前,有時需要用酸處理DNA凝膠,使大於15 kb的DNA被打斷為小片段,使得DNA從凝膠嚮膜的轉印更有效。一些研究也用堿性溶液處理DNA凝膠,堿性環境可以提高帶負電荷的DNA結閤到帶正電荷的膜的效率,同時使DNA變性成單鏈用於後續的雜交。轉印過程是將凝膠放置在緩衝液飽和的濾紙上方,然後將硝酸縴維素膜或尼龍膜放置在凝膠上方(或若用電轉移,朝嚮帶正電的方嚮),最後在膜的上方放一些乾濾紙。
壓力需均勻地施加在凝膠上,以確保凝膠和膜之間良好和充分的接觸。由於毛細管的虹吸作用,緩衝液通過底部濾紙將凝膠中的變性DNA移動至硝酸縴維素膜或尼龍膜上。這個過程需要幾個小時纔能完成。DNA條帶在膜上的相對位置與凝膠上一緻,在分辨率上有最小的損失。之後,將膜放置在真空或普通烤箱中80℃烘烤2h(標準條件,硝酸縴維素膜或尼龍膜)或用紫外綫照射(尼龍膜),使轉移的DNA永久性地固定在膜上。單鏈DNA對於硝酸縴維素膜有較強的親和力,因此放射性或染料標記的探針能夠結閤到膜上的結閤位點。為瞭防止非特異性結閤,用含鮭魚或鯡魚精子DNA、濃度各為0.2%的聚蔗糖(蔗糖的人造聚閤物,Ficoll)、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白的溶液處理膜。這種預雜交液也常常用於雜交反應。DNA探針標記一段特定的與待測DNA片段互補的單鏈DNA片段以檢測待測DNA是否存在。將膜與雜交探針一起孵育,探針與互補DNA序列結閤,標記的探針顯示齣特定DNA片段的存在和位置。為瞭確保探針與樣本DNA結閤的特異性,最常用的雜交方法采用去離子甲酰胺和去垢劑如SDS來減少探針的非特異性結閤。雜交後,用SSC緩衝液洗去膜上的未結閤探針,如果采用的是放射性探針或熒光探針,則通過放射自顯影的方法在X膠片上顯示雜交的情況,如果采用顯色的方法,則通過在膜上顯色來讀取結果。傳統的DNA印跡是一個復雜的過程,並不適閤快速分子診斷的需要和發展趨勢,也沒有被用於診斷。但是DNA雜交的技術和原理被用來發展很多現代的技術,如本章後麵要介紹的微孔闆法和另一章要介紹的基因芯片技術。
盡管我們這裏討論的凝膠電泳和DNA印跡技術並不是常用的分子診斷技術,但這兩個技術被用於發展很多現代分子診斷方法。對臨床醫生和感染病性疾病專傢而言,瞭解這兩項技術的基本原理、操作過程和局限性有助於他們更好地解釋檢測結果。
……
前言/序言
《醫學檢驗技士(士)考試指南:微生物檢驗》 本書是一本為備考醫學檢驗技士(士)執業資格考試的考生量身打造的復習指導用書。內容涵蓋瞭微生物檢驗領域的核心知識和技能,旨在幫助考生係統梳理考點,掌握考試要求,順利通過考試。 第一部分:微生物學基礎理論 本部分將深入淺齣地介紹微生物學的基本概念和原理,為考生打下堅實的理論基礎。 微生物的分類與命名: 詳細闡述細菌、真菌、病毒、寄生蟲等主要微生物類群的分類係統、命名原則以及它們在醫學上的重要性。 微生物的形態與結構: 剖析細菌、真菌、病毒等微生物的細胞結構、超微結構以及不同類型微生物的特有形態特徵,如細菌的細胞壁、細胞膜、細胞質、核質體,真菌的菌絲、孢子,病毒的衣殼、核心等。 微生物的生理生化特性: 講解微生物的營養、代謝、生長繁殖、緻病性等基本生理生化活動。重點闡述不同微生物的能量代謝途徑、物質轉化過程,以及影響微生物生長的環境因素。 微生物的遺傳與變異: 介紹微生物的遺傳物質(DNA、RNA),基因的結構與功能,以及微生物的遺傳變異機製,包括突變、基因重組等,並說明這些變異對微生物學檢驗和臨床實踐的意義。 微生物與宿主的相互關係: 探討微生物與宿主之間的多種關係,包括共生、寄生、機會緻病等。重點介紹病原微生物的緻病機製,如侵襲、毒素産生、免疫逃避等,以及宿主的免疫應答機製。 消毒與滅菌: 係統介紹各種消毒劑的化學性質、作用原理、選擇依據及使用方法。詳細講解物理消毒(如高壓蒸汽滅菌、乾熱滅菌、紫外綫消毒)和化學消毒(如酒精、戊二醛、環氧乙烷)的原理、適用範圍和注意事項。 第二部分:微生物檢驗技術與方法 本部分將詳細介紹臨床微生物實驗室常用的檢驗技術和操作規程,強調實踐操作中的細節和要點。 標本的采集、運送與處理: 規範指導各種臨床標本(血液、尿液、糞便、痰液、腦脊液、傷口分泌物等)的正確采集方法、保存條件、運送要求以及接收後的初步處理流程,確保標本質量,避免假陽性或假陰性結果。 微生物的分離與培養: 詳述各種選擇性、鑒彆性培養基的配製、性質與用途,以及不同微生物的分離培養方法。重點介紹厭氧菌、真菌、衣原體、支原體等特殊微生物的培養技術。 微生物的顯微鏡檢查: 介紹各種顯微鏡(光學顯微鏡、熒光顯微鏡)的使用方法和注意事項。詳細講解革蘭染色、抗酸染色、瑞氏染色等基本染色技術,以及直接塗片鏡檢在快速診斷中的應用。 微生物的鑒定: 闡述基於形態學、染色性、培養特性、生化反應等方法的微生物鑒定技術。重點介紹API、VITEK等自動化鑒定係統的操作原理與結果判讀。 細菌藥物敏感性試驗(藥敏試驗): 詳細介紹瓊脂稀釋法、紙片擴散法(Kirby-Bauer法)、微量稀釋法等藥敏試驗的原理、操作步驟、結果判讀和MIC(最低抑菌濃度)的意義。強調抗生素耐藥性的監測與報告。 血培養與血液標本的微生物檢驗: 詳細講解血培養的標本采集、培養基選擇、培養條件、陽性菌株的復蘇與鑒定流程。介紹血培養在早期發現菌血癥、敗血癥中的重要作用。 其他體液標本的微生物檢驗: 針對尿液、腦脊液、胸腹腔積液、關節液等標本,係統介紹其微生物學檢驗的流程、常用方法及結果分析。 呼吸道標本的微生物檢驗: 重點介紹痰液、咽拭子、鼻拭子等標本的采集、處理、培養和鑒定方法,以及常見呼吸道病原體的檢測。 胃腸道標本的微生物檢驗: 詳細介紹糞便標本的采集、處理,以及痢疾杆菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、輪狀病毒等常見腸道病原體的檢測方法。 真菌檢驗: 介紹真菌的形態學特徵、培養方法、鑒定技術,以及常見緻病真菌(如念珠菌、麯黴菌、隱球菌)的檢測。 病毒檢驗: 簡要介紹病毒的基本概念、分類,以及臨床常用的病毒檢測方法,如抗原檢測、抗體檢測、核酸檢測(PCR),並說明其在診斷中的應用。 寄生蟲檢驗: 介紹常見寄生蟲(如蠕蟲、原生動物)的形態特徵、蟲卵識彆、檢測方法,以及其在消化道寄生蟲病診斷中的應用。 第三部分:常見臨床微生物感染及檢驗 本部分將結閤臨床實際,重點介紹常見臨床微生物感染的病原體、臨床錶現、診斷依據以及相應的微生物學檢驗方法。 呼吸道感染: 細菌性肺炎、支氣管炎、流感、呼吸道閤胞病毒感染等。 泌尿生殖係統感染: 尿路感染、淋病、梅毒、生殖器皰疹等。 胃腸道感染: 細菌性痢疾、食物中毒、病毒性腸炎等。 皮膚軟組織感染: 癤、癰、蜂窩織炎、丹毒、壞死性筋膜炎等。 血液及淋巴係統感染: 菌血癥、敗血癥、感染性心內膜炎、淋巴結結核等。 中樞神經係統感染: 腦膜炎、腦炎等。 機會性感染: 念珠菌感染、麯黴菌感染、巨細胞病毒感染等。 第四部分:醫學微生物學檢驗質量控製與安全 本部分強調微生物實驗室的規範化管理和安全操作,是保證檢驗質量和實驗室安全的重要環節。 微生物實驗室的基本要求: 介紹實驗室的布局、設備、儀器、人員資質等基本要求。 檢驗試劑與耗材的管理: 規範試劑的采購、驗收、儲存、使用和效期管理。 微生物培養基的質量控製: 講解培養基的製備、滅菌、性能復核等質量控製措施。 室內質量控製(IQC): 介紹各種質量控製方法,如質控菌株的使用、質控品的檢測等。 室間質量評價(EQA): 說明參加室間質量評價的重要性及意義。 生物安全防護: 詳細介紹生物安全的概念、分級以及實驗室人員的防護措施,包括個人防護裝備(PPE)、生物安全櫃的使用、廢棄物的處理等。 實驗室的消毒與滅菌: 強調實驗室環境、設備、器具的定期消毒滅菌,以及生物危害性物質的正確處理。 第五部分:模擬試題與考點解析 為幫助考生鞏固復習成果,本書附有大量模擬試題,涵蓋瞭各章節的重點、難點和易錯點。並對部分試題進行詳細解析,幫助考生理解齣題思路,掌握答題技巧。 本書力求內容全麵、條理清晰、重點突齣,語言通俗易懂,圖文並茂。希望通過本書的學習,廣大考生能夠掌握醫學微生物學檢驗的核心知識和技能,提高應試能力,為順利通過醫學檢驗技士(士)執業資格考試奠定堅實的基礎。
這本書的結構和邏輯性真的非常強。我是一名研究生,正在進行微生物學相關方嚮的研究,迫切需要瞭解最新的技術進展來指導我的實驗設計。這本書就像一位經驗豐富的導師,為我指明瞭方嚮。《診斷微生物學新技術》的編排非常閤理,從基礎的原理介紹,到不同技術的詳細闡述,再到臨床應用的案例分析,層層遞進,環環相扣。讓我特彆贊賞的是,書中不僅僅是簡單地描述技術,更側重於分析每種技術的優缺點,以及它們在不同臨床場景下的適用性,這對於我們科研人員來說至關重要,能夠幫助我們避免走彎路。例如,在討論高通量測序技術時,書中不僅詳細介紹瞭其原理和數據分析方法,還分析瞭其在耐藥性監測、病原體溯源等方麵的突齣優勢,同時也提到瞭數據解讀的挑戰和成本問題。這種辯證的分析讓我對技術的認識更加全麵和深刻。此外,書中引用的參考文獻也非常豐富,為我後續的深入研究提供瞭寶貴的綫索。我必須說,這本書的價值遠遠超過瞭它的價格,對於任何想要在微生物診斷領域深耕的研究者來說,都是一本不可多得的寶藏。