我们下一步分析内源性凋亡途径的重要性,我们用Jurkat A3细胞和Western blot证明了caspase-9 DN突变的表达(数据未展示),caspase-9 DN 的出现与野生型细胞相比,大幅度降低了DHA诱导的细胞核碎片化。然而,当使用大于等于20微摩每升的DHA时,在caspase-9 DN细胞中明显的观察到了明显的凋亡性死亡的增加(图2A和B)。
评分这些说明了caspase8和FADD在DHA诱导的Jurkat细胞死亡中是不必要的。caspase-8不敏感的Jurkat细胞中凋亡反应的轻微减少可能反映线粒体通过caspase-8减弱了凋亡信号在下游的放大(图1C)。泛caspase抑制剂zVAD -fmk的增加取消了DHA诱导的caspase-3活化和细胞核碎片化,说明caspase活化对于DHA诱导的细胞死亡是必须的。然而,一个基本的PARP水平差距还是能在zVAD –fmk处理的样品中检测到,尤其是在FADD不敏感的A3细胞中(图1D,补充图S2B)。因为zVAD –fmk的存在也触发了Hoechst 33342 PI染色样品中坏死核的出现(图1D)。这些残余的PARP差异可能是诱发坏死的结果。
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评分DHA介导的凋亡在Jurkat(白血病)细胞中依赖内源性死亡途径
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